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              解决方案  

            免疫组化遇到的问题及其解决办法(表)


            发布日期:[2017-07-13] 共阅[558]次

            1、染色过强:

            原因

            解决办法

            抗体的浓度过高或抗体孵育时间过长降低抗体滴度(一般指浓缩性抗体)抗体孵育时间:室温1小时或4℃过夜
            孵育温度过高,孵育温度超过37℃一般室温20-28℃
            DAB显色时间过长或DAB浓度过高显色时间不能超过5-10分钟,以显微镜下观察为准

            2、非特异性背景染色:

            原因

            解决办法

            操作过程中冲洗不充分每步冲洗3×5
            组织中含过氧化物酶未阻断可再配置新鲜3%H2O2封闭,孵育时间延长
            组织中含内源性生物素正常非免疫动物血清再封闭
            血清蛋白封闭不充分延长血清蛋白封闭时间

            3、染色弱:

            原因

            解决办法

            抗体浓度过低,孵育时间过短提高抗体浓度,孵育时间不能少于60分钟
            试剂超过有效使用期及时更换试剂
            操作中,滴加试剂时缓冲液未沥干,致使试剂稀释每?#38477;?#21152;试剂前沥干切片中多余的缓冲?#28023;?#20294;防止切片干燥)
            室温太低,低于15℃若室温低于15度,要改放在37℃孵育箱孵育30-60分钟(或4℃冰箱过夜)
            蛋白封?#23637;?#24230;封闭时间不要超过10分钟

            4、染色阴性:

            原因

            解决办法

            操作步骤错误重新试验,设立阳性对照
            组织中无抗原设立阳性对照片,以验证实验结果
            一抗与二抗种属连接错误仔细确定一抗与二抗种属无误

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            主营:ELISA检测试剂盒;免疫组化试剂盒,胎牛血清;酶联免疫试剂盒,进口抗体,生物试剂 公司地址:上海市闵行区莘庄工业园区金都路3688号E幢101-106室 ?#25910;?#32534;码:201100 
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